La contaminació dels cultius cel·lulars pot esdevenir fàcilment el problema més comú als laboratoris de cultius cel·lulars, provocant de vegades conseqüències molt greus.Els contaminants del cultiu cel·lular es poden dividir en dues categories, contaminants químics com ara impureses del medi, sèrum i aigua, endotoxines, plastificants i detergents, i contaminants biològics com bacteris, floridures, llevats, virus, infecció creuada per micoplasmes.Contaminada per altres línies cel·lulars.Tot i que és impossible eliminar completament la contaminació, la seva freqüència i gravetat es poden reduir si entenem a fons la seva font i seguint bones tècniques asèptiques.
1. En aquesta secció es descriuen els principals tipus de contaminació biològica:
Contaminació bacteriana
Contaminació de motlles i virus
Contaminació per micoplasmes
Contaminació per llevats
1.1 Contaminació bacteriana
Els bacteris són un gran grup de microorganismes unicel·lulars omnipresents.Solen tenir unes poques micres de diàmetre i poden tenir diverses formes, des d'esferes fins a varetes i espirals.A causa de la seva ubiqüitat, mida i rapidesa de creixement, els bacteris, juntament amb els llevats i els floridures, són els contaminants biològics més comuns en el cultiu cel·lular.
1.1.1 Detecció de contaminació bacteriana
La contaminació bacteriana es detecta fàcilment mitjançant la inspecció visual del cultiu als pocs dies des que s'ha infectat;
Els cultius infectats solen aparèixer tèrbols (és a dir, tèrbols), de vegades amb una pel·lícula fina a la superfície.
També es troben freqüents caigudes sobtades del pH del medi de cultiu.
Sota un microscopi de baixa potència, els bacteris apareixen com a petits grànuls en moviment entre les cèl·lules, i l'observació sota un microscopi d'alta potència pot resoldre les formes dels bacteris individuals.
1.2 Contaminació de motlles i virus
1.2.1 Contaminació de motlles
Els motlles són microorganismes eucariotes del regne dels fongs que creixen en forma de filaments pluricel·lulars anomenats hifes.Les xarxes connectives d'aquests filaments pluricel·lulars contenen nuclis genèticament idèntics anomenats colònies o miceli.
De manera similar a la contaminació per llevats, el pH del cultiu es manté estable durant la fase inicial de contaminació i després augmenta ràpidament a mesura que el cultiu s'infecta més greument i es torna tèrbol.Al microscopi, el miceli sol ser filamentós, de vegades com densos grups d'espores.Les espores de molts floridures poden sobreviure en entorns extremadament durs i inhòspits durant la seva fase latent i només s'activen quan es troben les condicions de creixement adequades.
1.2.2 Contaminació per virus
Els virus són agents infecciosos microscòpics que es fan càrrec de la maquinària de la cèl·lula hoste per a la reproducció.La seva mida extremadament reduïda fa que siguin difícils de detectar en cultiu i d'eliminar-los dels reactius utilitzats als laboratoris de cultiu cel·lular.Com que la majoria dels virus tenen requisits molt estrictes per als seus hostes, normalment no afecten negativament els cultius cel·lulars d'espècies diferents de l'hoste.
No obstant això, l'ús de cultius cel·lulars infectats amb virus pot suposar un risc greu per a la salut del personal del laboratori, especialment si es cultiven cèl·lules humanes o de primats al laboratori.
La infecció vírica en cultius cel·lulars es pot detectar mitjançant microscòpia electrònica, immunotinció amb un conjunt d'anticossos, ELISA o PCR amb cebadors virals adequats.
1.3 Contaminació per micoplasmes
Els micoplasmes són bacteris simples sense paret cel·lular i es creu que són els organismes més petits que s'autoreplican.A causa de la seva mida extremadament reduïda (generalment menys d'1 micra), els micoplasmes són difícils de detectar fins que arriben a densitats extremadament altes i fan que els cultius cel·lulars es deteriorin;Fins aleshores, normalment no hi ha cap signe evident d'infecció.
1.3.1 Detecció de contaminació per micoplasmes
Alguns micoplasmes de creixement lent poden persistir en cultius sense causar la mort cel·lular, però alteren el comportament i el metabolisme de les cèl·lules hoste en cultius.
La infecció crònica per micoplasma es pot caracteritzar per una taxa de proliferació cel·lular reduïda, una disminució de la densitat de saturació i una aglutinació en cultiu en suspensió.
Tanmateix, l'única manera fiable de detectar la contaminació per micoplasma és provar el cultiu amb regularitat mitjançant tinció fluorescent (per exemple, Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunotinció, autorradiografia o proves microbianes.
1.4 Contaminació per llevats
Els llevats són eucariotes unicel·lulars del regne dels fongs, que varien en mida des d'unes poques micres (normalment) fins a 40 micres (rarament).
1.4.1Detecció de contaminació per llevats
Igual que amb la contaminació bacteriana, els cultius contaminats amb llevats es poden ennuvolar, sobretot si la contaminació es troba en una fase avançada.El pH dels cultius contaminats amb llevats varia molt poc fins que la contaminació es fa més severa, moment en què el pH sol augmentar.Al microscopi, el llevat apareix com a partícules individuals ovoides o esfèriques i pot produir partícules més petites.
2.Infecció creuada
Tot i que no és tan freqüent com la contaminació microbiana, la contaminació creuada extensa de moltes línies cel·lulars amb HeLa i altres línies cel·lulars de creixement ràpid és un problema clarament definit amb conseqüències greus.Obteniu línies cel·lulars de bancs de cèl·lules de renom, comproveu regularment les característiques de les línies cel·lulars i utilitzeu bones tècniques asèptiques.Aquestes pràctiques us ajudaran a evitar la contaminació creuada.L'empremta d'ADN, el cariotip i la isotipat poden confirmar si hi ha contaminació creuada al vostre cultiu cel·lular.
Tot i que no és tan freqüent com la contaminació microbiana, la contaminació creuada extensa de moltes línies cel·lulars amb HeLa i altres línies cel·lulars de creixement ràpid és un problema clarament definit amb conseqüències greus.Obteniu línies cel·lulars de bancs de cèl·lules de renom, comproveu regularment les característiques de les línies cel·lulars i utilitzeu bones tècniques asèptiques.Aquestes pràctiques us ajudaran a evitar la contaminació creuada.L'empremta d'ADN, el cariotip i la isotipat poden confirmar si hi ha contaminació creuada al vostre cultiu cel·lular.
Hora de publicació: 01-feb-2023